En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de las células de pulpa de plátano poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de larguísimas cadenas de esta molécula.
Fundamento:
El ADN se encuentra en el interior del núcleo de todas
las células, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la
cromatina. Por lo tanto, podremos extraerlo a partir de prácticamente cualquier
material de origen biológico. Para ello es necesario homogeneizar el tejido
disgregándolo y separando sus células y demás componentes, luego romper las
células para separar el núcleo y romper éste para liberar el ADN, separarlo de
las proteínas y precipitarlo para separarlo de la solución acuosa.
El ADN (y también algo de ARN) aparecerá entonces como
un agregado de fibras blanquecinas de aspecto mucoso que se adhieren a una
varilla de vidrio o a la pipeta. Podemos añadir unas gotas de azul de metileno
o verde de metilo al tubo para teñirlo. Por último, se puede situar sobre un
porta, teñirlo de la misma manera y observarlo al microscopio. También se puede
conservar dejándolo secar sobre papel de filtro o suspendido en alcohol al 50%
o 70%.
Materiales:
-Plátano
-Tenedor
-Detergente tipo lavavajillas
-Papel de filtro
-Cristalizador
- Agua destilada
-Alcohol 95º
-Sal
-Vaso de precipitado
-Cuchara
-Embudo
Procedimiento:
1- Batir un
plátano en 250 ml de agua destilada durante 15 a 20 segundos hasta obtener
una papilla homogénea.
2- Por otra parte, en un vaso de precipitado pequeño se mezcla una
cucharada de lavavajillas líquido con dos pizcas de sal de mesa.
3- Añadir 20 ml de agua destilada a la mezcla de
champú y sal.
4- Añadir ahora tres cucharaditas del puré de plátano a lo anterior y
mezclar con la espátula durante 5 ó 10 minutos evitando formar espuma.
5- Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico por cada grupo y poner
a enfriar lo máximo que sea posible, por ejemplo en baño de agua con hielo.
Mejor aún si se ha mantenido refrigerado hasta el momento de realizar la
práctica.
6- Con los pasos anteriores hemos
conseguido liberar el ADN en la disolución acuosa, la cual contendrá también
diversos restos tisulares y celulares.
